篇一：动物微生物及免疫学(实践教学)实验报告
四川农业大学
动物微生物及免疫学（实践教学）
实验报告
组长：**********
组员：**********
二零一二年四月
一、 实验目的
（一） 掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，
熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。
（二） 掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法
和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。
（三） 掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。
二、 实验用品
（一） 器材
量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜
（二） 试剂及材料
肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏
三、 实验步骤
（一） 培养基的制备
（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）
1、 麦康凯培养基
（1） 组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖
10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml
（2） 方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节
pH至7.2。将琼脂加入600ml蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。将两液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌
15~30min。待冷却至50 ~ 55℃ 时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。
2、 血清平板
（1） 组成：营养琼脂、牛血清
（2） 方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并
混匀，倾注平板。
注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。
3、 LB培养基
（1） 组成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂15g
（2） 方法：在950ml蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化
钠，调节pH至7.4，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。待冷却至50 ~ 55℃ 时，倾注平板。
4、 液体培养基（在LB培养基的基础上，装入大试剂瓶中，不加琼脂，不分装）
（二） 病料取材
在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行生理解剖，观察其病理特征现象，取出病猪的十二指肠、胃、肝脏三处的组织物，并注意组织的完整性，用储物袋密封保存。
（三） 细菌粗培养
1、 消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。
2、 接种
（1） 在无菌操作台酒精灯旁打开用储物袋密封保存的病料，先左手持镊子右
手持剪刀，把病料剪出一个小口。
（2） 右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭
开约20左右，然后将接种环前端插入小口旋转一下后，再用划线接种的方法接种到一个血清平板上。
（3） 用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、部位等标记，并将平板倒
放。以此方法，分别接种十二指肠、胃粘膜、肝脏于血清平板上，各接种2个血清平板。
3、 培养：将接种好的血清平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小。时。
注：划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落，且划线时接种环应尽量倾斜，以免划破培养基（后同）；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。
（四）
1、 细菌纯培养 菌落特征判断
待粗培养的细菌培养24小时后，取出用放大镜观察记录单个小菌落的形态特征并用实验报告纸记录好，并在平板底部上做好观察标记，其形态特征包括大小、形状、菌落边缘、表面构造、隆起度、湿润度、透明度、颜色等。
2、 取单个菌落进行革兰氏染色镜检
（1） 取干净的载玻片，用记号笔在其一面做好正反面标记，再在载玻片另一
面中央滴上一小滴蒸馏水。
（2） 将接种环在火焰上灭菌，待冷却后，在酒精灯旁从标记的单个小菌落中
取少许细菌置于蒸馏水中混匀（同时盖好平板倒扣置于一旁），用接种环涂成直径约1.5cm的菌膜，再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌，待冷却进行染色。
（3） 先滴加草酸结晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革兰氏碘液溶液
染色1~2min，再水洗；随后滴加95%的酒精脱色30~60s，再水洗；最后滴加稀释的品红进行复染30~60s，再水洗；待干燥或吸水纸吸干后镜检。
（4） 将干燥的载玻片放在1000倍油镜下，滴加一滴松柏油进行镜检，观察其
形态特征，判断细菌的种属。
3、 细菌接种培养
（1） 消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对
无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。
（2） 接种：右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将
平皿揭开约20左右，然后将接种环插入揭开的平板口内蘸去一下镜检标记的小菌落，再用划线接种的方法接种到一个血清平板、LB平板或麦康凯平板上。并用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、菌种、部位等标记，将平板倒放。
（3） 将接种好的平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。
注：油镜用完后应立即清理物镜上的松柏油；划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。 。
（五）
1、 菌液的制备 镜检：用革兰氏染色法在1000倍油镜下镜检，观察并记录是否为纯培养的细菌。
篇二：动物微生物及免疫学实验准备
实验一 显微镜油镜的使用及维护+
实验二 细菌基本形态及结构观察
一、药品配制
1、擦镜液500ml：乙醚150ml+无水乙醇350ml（先乙醚后乙醇）；
二、玻璃器皿与耗材
1、载玻片（1瓶/组）
2、火柴
3、酒精棉球（1瓶/组）
4、纱布
5、菌种（烧杯2个、试管4支、移液管、洗耳球）（1套/组）
6、蒸馏水（1瓶/组）
7、洗液缸（1个/组）
8、擦镜纸（显微镜室一组一套）
9、擦镜液（显微镜室）
10、废液缸（显微镜室）
11、香柏油（显微镜室）
三、器材
1、试管架（1个/组）
2、接种环（3支/组）
3、酒精灯（2个/组）
4、镊子（2把/组）
实验三 细菌抹片、制片及染色
一、药品配制
第二种（1）将载玻片在肥皂水中沸浴5－10min.
（2）在热水中洗去残留物。
（3）清水冲洗后，让水滴流干。
（4）浸入洗液（200g 重铬酸钾，1000ml清水，1000ml浓硫酸（工业用）。 将重铬酸钾先溶于水中，然后将浓硫酸逐滴加入重铬酸钾水溶液中去，不使硫酸溅出。配好后，盛在有玻璃塞的玻璃容器内，防止空气氧化。洗液可重复使用直至变为蓝黑色为止。）约30min.
(5)清水冲洗后用蒸馏水洗净，并让水滴流干。
（6）浸入95%酒精中贮存备用。使用时从酒精中取出盖玻片和载玻片，用清洁纱布同时擦拭玻片的两面，在擦拭盖玻片时要小心，用力要均匀，避免碎裂。
第三种
①将待处理的载玻片放入清洁剂（雕牌玻璃清洁剂加水稀释至1%）浸泡20分钟，
②从清洁剂中将载玻片取出，流水冲洗干净，用软布擦干，放入95%的酒精中备用。
二、玻璃器皿与耗材
1、载玻片（1瓶/组）
2、革兰氏染液（结晶紫溶液、革兰氏碘液、95%酒精、稀释的复红）（1套/组）
3、蒸馏水（1瓶/组）
4、菌种（烧杯2个、试管4支、移液管、洗耳球）（1套/组）
5、酒精棉球（1瓶/组）
6、洗液缸（1个/组）
7、洗瓶（1个/组）
8、烧杯
9、擦镜纸（显微镜室一组一套）
10、擦镜液（显微镜室）
11、废液缸（显微镜室）
12、香柏油（显微镜室）
三、器材
1、酒精灯（2个/组）
2、镊子（2把/组）
3、接种环（3个/组）
4、火柴
5、废物缸（1个/组）
6、试管架（1个/组）
实验四 培养基的制作
一、玻璃器皿与耗材
1、量筒（500ml， 100ml/200ml 各1个/组）
2、烧杯（500ml 1个， 50ml/100ml 2个/组）
3、三角烧瓶（250ml 2个/组）
4、试管（2支*人数/组）
5、培养皿（2套*人数/组）
6、玻棒（1支/组）
7、PH试纸（公用）
8、纱布（公用）
9、脱脂棉（公用）
10、试管塞（公用）
11、扎绳（公用）
12、报纸（公用）
13、蛋白胨（1瓶/2组）
14、氯化钠（1瓶/2组）
15、琼脂粉（1瓶/2组）
16、牛肉膏（1瓶/2组）
17、0.1%氢氧化钠溶液（公用）
18. 稀释盐酸溶液（公用）配滴管
19、试管架（1个/组）
三、器材
1、托盘天平、称量纸、培养皿（2个）、药勺：（
2、电炉
3、高压蒸汽锅（检查底部是否有水）
1套/1组）
实验五 细菌分离培养及移植
一、药品配制
二、玻璃器皿与耗材
1、培养皿（做好的培养基）（2套*人数/组）
2、玻璃推棒（1支/组）
3、棉签（1包/ 2组）
4、试管（做好的培养基）（2支*人数/组）
5、试管架（一个/组）
6、土壤（用50-100ml烧杯装，1瓶/ 2组）
7、污水（用50-100ml烧杯装，1瓶/ 2组）
三、器材
1、接种环（2-3支/组）
2、酒精灯（2个/组）
3、火柴
实验七 细菌的生理生化实验
一、玻璃器皿与耗材（糖类分解实验）
1、菌种（老师提供）（1套/组）
2、发酵管（2支*人数/ 组，用小烧杯盛装），需让每个组均有以下几种类型的发酵管：乳糖微量发酵管+蔗糖微量发酵管+葡萄糖微量发酵管+麦芽糖微量发酵管
3、烧杯（1个/组）
4、酒精棉球（1瓶/组）
5、酒精灯（1个/组）
三、器材
1、接种环（2-3支/组）
2、镊子
3、废物缸
实验八 凝集及沉淀实验
一、药品配制
1、 琼脂板制备：称取 1g琼脂粉，加入100ml 生理盐水或0.85% NaCl溶液（禽类），煮沸使之溶解。待溶解的琼脂温度降至 60℃左右时倒入平皿中，厚度为2-3mm。
二、玻璃器皿与耗材
A、鸡白痢平板凝集试验
1、 移液枪（20微升，1把/组）
2、 枪头：（20微升，1盒/组）
3、 载玻片：（1瓶/组）
4、 牙签：（1盒/组）
5、 标签纸、糨糊（综合一套）
B、琼脂扩散沉淀试验
1、 琼脂粉1瓶、氯化钠1瓶：（1套/2组）
2、 托盘天平、称量纸、药勺：（1套/2组）
3、 搪瓷盅（1000ml）、量筒（500ml）、烧杯（150ml，2个）：（
4、 打孔器（孔径约 3-5mm）：（1把/组）
5、 培养皿：（1套/人）
6、 酒精灯：（1个/组）
7、 移液枪+枪头（公共用）
8、 鸡血清：（公共用）
9、 废液缸：（1个/组）
1套/2组）
篇三：13畜牧微生物与免疫实验1
农工商学院2013级畜牧兽医专业
《动物微生物与免疫》课程实验指导
实验一 显微镜油镜的使用和细菌标本片的制备及观察
实验目的：
了解普通光学显微镜油镜原理及使用；
掌握细菌标本片的制备方法，掌握细菌形态的观察和描绘。
实验器材：
1. 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸；
2. 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌培养物；
3. 载玻片、接种环、酒精灯、打火机、碱性美兰染色液、生理盐水、滴管、吸
水纸、计时器。
实验内容：
一、 油镜使用的原理
对于个体微小，用高倍镜仍观察不清的微生物，则必须使用油镜。使用时，
需要在标本和物镜间加入一种镜头油。如香柏油，所以叫油浸接物镜，简称油镜。
一般在镜头上有一黑圈或红圈的，表示为油镜物镜，也有的“以 IO”或“HI”字样
来表示。
由于油镜镜面很小，使用时检视物与镜面又非常靠近（0.14~0.19mm左右），
因而使进入镜头的光线较少。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由
于玻片与物镜之间的介质为空气（接物镜干燥系）。空气折射率为1，由于空气
与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射现象，结果进入物镜的光线必然
减少，这样就降低了视野的照明度。若载玻片与物镜之间的介质不是空气，而是
一层油质，一般常用香柏油，其折射率为1.515，与玻璃的折射率（1.52）相近。
光线通过载玻片可直接通过香柏油进入物镜而几乎不发生折射（接物镜油浸系），
使视野增加进光量，这样就能使物像更加清晰，见图1。
图1 干燥物镜与油浸系统物镜光线通路
二、显微镜油镜的使用方法
1. 用前检查
从显微镜箱中取出显微镜时，用左手拿镜臂，左手托镜座，直立移动，轻放
在平稳的桌面上，检查各部零件是否齐全，镜头是否清洁。
2. 调节光照
正确的照明是获得良好检查效果的前提、用粗调节器提升镜筒，将低倍物镜
旋到镜筒下方，使镜头和载物台距离约为5mm左右，左眼看目镜调节反光镜镜
面角度（在天然的光线下观察，一般用平面反镜；若以灯光为光源，则一般多用
凹面反光镜）。调节光线强弱，然后调节聚光镜的位置（酌予升降），直至视野内
得到最均匀最适宜的光度为止。
3. 低倍镜观察
低倍物镜视野面广，焦点深度较深，易于发现目标确定观察位置，故应先用
低倍镜观察为宜。
将载片标本（涂面朝上）置于载物台的标本夹上，并将标本部位处于物镜的
正下方，转动粗调节器，使镜头下降至镜面距离检视物大约10mm处。然后以左
眼看目镜，另一眼睁开，一边观察视野，一边扭动粗调节器使镜头缓慢地升高，
至视野内出现物像后，改用细调节器上下微微转动，仔细调节焦距和照明，直至
视野内获得清晰的物像，选择适宜部位，移到视野中心，待换中、高倍镜观察。
4. 依次再进行中倍、高倍观察
在物镜依次由低倍至中倍、高倍的观察过程中，应逐次上升聚光镜以调节光
线亮度，同样选择适宜的部位移至视野中央。
5. 油镜观察
将聚光镜提升至最高点，转动转换器，移开高倍镜，使高倍镜和油镜成“八”
字形，在标本中央滴一小滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，微微转动细调节
器，可见清晰物像，如果油镜上升已离开油面还未看清物像的话。需重新调节。
此时可从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜
头几乎与标本相接。应特别注意不能压在标本上，更不能用力过猛否则不仅压碎
玻片，也会损坏镜头。用左手向上转动粗调节器，当视野中有模糊的标本物像时
改用细调节器，直到看清物象为止。
6. 换片
另换新的标本片，必须从第三条开始操作。
7. 用后必须清洁、复原
观察完毕，上旋镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少
许二甲苯（注意不能过多，防止溶解固定镜头的树脂）擦去镜头上的残留油迹，
最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。机械部件用细软布擦去灰尘和冷凝水，下降
镜筒，将物镜转成八字形置于载物台上。下降聚光镜，（切勿使物镜与聚光镜相
碰受损），反光镜垂直于镜座。放进显微镜箱中锁好，并放入指定的显微镜柜中。
8. 显微镜保养和使用中的注意事项
（1）不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。
（2）镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布擦，以保证镜面的光洁度。
（3）观察标本时，必须依次用低倍镜、中倍镜、高倍镜，最后用油镜、当目视
目镜时，特别在使用油镜时，切不可用粗调节器向下旋，以免物镜碰到玻片损伤
镜面或压碎玻片。
（4）观察时，两眼睁开养成两眼能够轮换观察的习惯以免眼睛疲劳，并能够在
左眼观察时，右眼注视绘图。
（5）拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜
拿动
（6）显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。
三、细菌抹片的制备和染色
1.用经火焰灼烧灭菌的接种环，蘸取一小滴生理盐水于玻片上，再用灭菌的接种
环取细菌的培养物少许与玻片上的液滴混匀，涂抹成直径1~1.5cm的均匀涂片；
2.抹片自然干燥后，将涂面向上，以其背面在酒精灯火焰上通过几次，略微加热
（以杀死细菌，又不能太热，以不烫手背为好）进行固定；
3.用美兰进行单染色，即将碱性美兰染液滴加于已干燥好的涂片上，使其覆盖整
个涂抹面，染色2~3min，水洗，干燥后镜检。
（4.如果有条件也有时间，可以继续做革兰染色实验或演示实验）
复习题与作业（实验报告）
1. 简要概括油镜的基本原理及操作步骤。
2. 画出观察到的细菌的形态图。
（3.简述革兰染色的原理及步骤）
实验报告
年级专业： 班级： 姓名： 学号：实验时间： 实验题目：《 》 实验目的：
主要实验器材：
基本原理：
简要操作步骤：
实验注意事项：
实验结果：
分析讨论：
教师签名：成绩：
《动物微生物与免疫,培养细菌实验报告怎么写》
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