柑桔木虱与烟草的关系 本文关键词：柑桔，烟草，关系
柑桔木虱与烟草的关系 本文简介：摘要为探明柑桔木虱与烟草之间的关系，测定了柑桔木虱在烟草上的存活力、柑桔木虱成虫对烟草和默科特桔橙叶片的行为反应及柑桔木虱对健康烟草传毒的可能性。结果显示，柑桔木虱在烟草上存活的时间不会超过３６ｈ；对烟草嫩叶的趋性强于默科特桔橙嫩叶；带菌柑桔木虱刺吸烟草后，可把柑桔黄龙病菌传给烟草，但烟草不表现病症
柑桔木虱与烟草的关系 本文内容：
摘要为探明柑桔木虱与烟草之间的关系，测定了柑桔木虱在烟草上的存活力、柑桔木虱成虫对烟草和默科特桔橙叶片的行为反应及柑桔木虱对健康烟草传毒的可能性。结果显示，柑桔木虱在烟草上存活的时间不会超过３６ｈ；对烟草嫩叶的趋性强于默科特桔橙嫩叶；带菌柑桔木虱刺吸烟草后，可把柑桔黄龙病菌传给烟草，但烟草不表现病症。
关键词柑桔木虱；烟草；存活时间；趋性；柑桔黄龙病
柑桔木虱犇犻犪狆犺狅狉犻狀犪犮犻狋狉犻除直接为害柑桔、黄皮、九里香等芸香科植物新梢、若虫分泌物诱发煤烟病外［１］，还是传播柑桔毁灭性病害———柑桔黄龙病的媒介昆虫［２３］。控制柑桔木虱是阻止柑桔黄龙病扩散蔓延的最重要手段［４］。大量的田间调查与生产实践证明，没有柑桔木虱就没有黄龙病［５］。当前，防治柑桔木虱的主要措施是喷洒化学农药［６］。在柑桔木虱重灾区，打药次数逐年增多，用药量也不断加大，柑桔木虱的抗药性问题逐渐显现［７］。若能开发出有效控制柑桔木虱种群基数的方法，则不仅可减少化学农药对环境的破坏，还有助于降低柑桔黄龙病的发生率［８］。２０１４年底江西省赣州市安远县的果农反映在果园附近的烟草上发现有柑桔木虱，２０１５年夏天笔者到现场辨认和鉴定，确定在烟草上的昆虫为柑桔木虱，且都已经死亡。柑桔木虱为何会到烟草上且都死亡？针对此，笔者对柑桔木虱与烟草之间的关系进行了研究。
１材料与方法
１．１试验材料
云烟８７烟草犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿幼苗由赣州市烟草科学研究所提供，移栽在赣州市柑桔科学研究所示范场内。默科特桔橙嫩叶、梢和幼苗来自赣州市柑桔科学研究所示范场。柑桔木虱成虫采自感染柑桔黄龙病的柑桔树。以柑桔黄龙病菌犆犪狀犱犻犱犪狋狌狊Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒａｓｉａｔｉｃｕｓ靶序列特征片段（４００ｂｐ）构建的重组质粒ＤＮＡ为阳性对照，以无菌烟草幼苗为无病毒阴性对照。ＰＣＲ反应试剂购自北京博迈德生物公司，其他试剂均为分析纯或生化试剂。柑桔黄龙病菌１６ＳｒＤＮＡ基因序列扩增引物（Ｐ１：５’ＧＴＣＴＡＡＧＴＧＣＡＡＴＧＣＴＣＡＡＣ３’；Ｐ２：５’ＧＡＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＡ３’）由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。
１．２试验方法
１．２．１柑桔木虱成虫对烟草和默科特桔橙叶片的行为反应参照Ｄｕ等［９］的设计制作Ｙ型嗅觉仪。Ｙ型嗅觉仪由无色玻璃制成，各臂长１０ｃｍ，两臂夹角为９０°，内径１ｃｍ。装置组成依次为：大气采样仪、活性炭过滤装置、加湿瓶、流量计、味源瓶、Ｙ型嗅觉仪。味源瓶中分别放置３０ｇ被测品种（烟草、默科特桔橙）嫩叶。测定时间为１０：００—１２：００，温度控制在（２６±２）℃、空气相对湿度（５０±５）％，Ｙ型嗅觉仪两臂气流量控制在１３０ｍＬ／ｍｉｎ，上方放一盏２５Ｗ荧光灯。从Ｙ型嗅觉仪主臂端口逐头释放柑桔木虱成虫，每次观察５ｍｉｎ，当其爬行距离超过某臂３ｃｍ时，记为选择了该臂；５ｍｉｎ内无选择的，记为无行为反应。每测３０头后调换Ｙ型管方向一次，共调换３次；每测完３０头用９５％乙醇擦洗管的内、外壁，烘干后使用，以消除误差。记录反应虫数。行为反应按照公式计算选择率。选择率（％）＝（选择味源瓶的虫数÷测试总虫数）×１００。处理结果用Ｄｐｓ７．０５进行差异性统计分析。１．２．２柑桔木虱在烟草上的存活力将带有嫩梢的烟草和嫁接２年的默科特桔橙苗移入生态培养箱。培养箱参数设置为：温度（２６±２）℃，空气相对湿度（５０±５）％，光周期１６Ｌ∶８Ｄ。重复３次，分次接入２０～２５头柑桔木虱成虫。在接入后２４和３６ｈ时间点，观察记录柑桔木虱成虫生存情况。处理结果用ｄｐｓ７．０５进行差异性统计分析。１．２．３带菌柑桔木虱对健康烟草传毒的试验２０１６年４月２７日，将２０００头采自已显柑桔黄龙病症状的柑桔病树上的柑桔木虱成虫，释放到默科特桔橙营养袋苗网棚内，释放７ｄ后，将９株７０ｃｍ高烟草移入网棚内且随机摆放。再过７ｄ后，将这９株烟草及另外３株未接触过柑桔木虱的健康烟草一起移入４０目防虫网棚内培育。同时，把每株烟草上诱到的死亡柑桔木虱做好标记，分别用７５％酒精浸泡带到实验室进行单个检测，看其携带柑桔黄龙病菌的情况。２个月后分别取每株烟草的上、中、下３个部位的叶片和叶茎进行检测，看烟草携带柑桔黄龙病菌的情况。参照李菁等［１０］报道的柑桔木虱样品快速制样方法，将单头新鲜柑桔木虱样品放入０．２ｍＬ微离心管中，加入３０μＬ研磨缓冲液（１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ，１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，２５ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ），用烧熔后的枪头进行彻底研磨，再加入１μＬ蛋白酶Ｋ（２００μｇ／ｍＬ），在５６℃恒温器中消化４５ｍｉｎ。消化后的产物在９５℃保温１ｍｉｎ，３０００ｇ离心３０ｓ沉淀残渣，上清液作为ＰＣＲ的模板或保存在－２０℃冰箱中备用。采用ＣＴＡＢ法从烟草叶片或叶茎中分别提取总ＤＮＡ。详细步骤如下：取０．５ｇ叶片或叶茎，剪碎，加入液氮磨成粉末状；加入ＣＴＡＢ缓冲液混匀，装于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中；用苯酚／氯仿、氯仿／异戊醇抽提２～３次，取上清液，加入１／１０体积３ｍｏｌ／ＬＮａＯＡｃ（乙酸钠，ｐＨ值７．０）及２倍体积无水乙醇于－２０℃过夜；４℃条件下１６０００ｇ离心２０ｍｉｎ，弃上清液，分别用７０％和９５％乙醇洗沉淀各１次，室温条件下静置晾干。ＰＣＲ反应体系（２５μＬ）含有终浓度为１×ＰＣＲ缓冲液、０．２５μｍｏｌ／Ｌ靶序列引物对Ｐ１／Ｐ２、０．３ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｓ、２．０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２、１ＵＴａｑ酶以及适量模板。ＰＣＲ反应程序：预扩增９４℃２ｍｉｎ；９２℃２０ｓ，５６℃３０ｓ，７２℃４５ｓ，共３０个循环；末次延伸７２℃，７ｍｉｎ。ＰＣＲ反应结束后，用１．５％琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。
２结果与分析
２．１柑桔木虱成虫对烟草和默科特桔橙叶片的行为反应
柑桔木虱成虫对烟草、默科特桔橙嫩叶均表现出趋性。在３０头测试成虫中，停留在主臂上的虫数为（６．２５±０．９６）头，选择烟草和默科特桔橙味源臂虫数分别为（１９．２５±０．９６）头和（４．５０±１．２９）头，对烟草和默科特桔橙趋性正向反应率（选择率）分别为（６４．２±３．２１）％和（１５．０±４．３１）％。ｔ检验结果表明，柑桔木虱成虫对烟草和默科特桔橙选择率差异有显著性（狆＜０．０５）。可见，烟草对柑桔木成虫具有的诱性强于默科特桔橙。
２．２柑桔木虱在烟草上的存活力
柑桔木虱成虫移接２４ｈ后，在烟草嫩叶上的死亡率达（４５．２±１．４）％，在默科特桔橙苗上死亡率只有（１．５±１．５）％，ｔ检验结果表明，两者差异有显著性。移接３６ｈ后，在烟草嫩梢上的死亡率达（１００．０±０）％，默科特桔橙苗上死亡虫数不变，死亡率仍为（１．５±１．５）％，ｔ检验结果表明，两者差异有显著性。说明，柑桔木虱在烟草上存活的时间不会超过３６ｈ。
２．３烟草的带毒性
在烟草诱杀的单头柑桔木虱和柑桔木虱刺吸的烟草叶片均可以稳定地检测出柑桔黄龙病菌特异序列片段ＤＮＡ（４００ｂｐ），但在烟草叶茎中未检测出柑桔黄龙病菌（见图１）。说明，带菌柑桔木虱刺吸烟草后，可将柑桔黄龙病菌传给烟草，使烟草带毒。
３结论与讨论
烟草嫩叶对柑桔木虱成虫的诱性强于默科特桔橙嫩叶，且柑桔木虱在烟草上的存活力不超过３６ｈ，说明烟草对柑桔木虱具有诱杀功能。带毒柑桔木虱刺吸烟草后，可将柑桔黄龙病菌传给烟草，可在烟草叶片组织中检出，但在烟草叶茎中未检出。程保平等［１１］研究发现，柑桔黄龙病菌在染病植株的根、茎、花、果、叶中的分布并不均匀。烟草叶茎中未检测到柑桔黄龙病菌，可能是由于该部位柑桔黄龙病病菌浓度极低，从而导致ＰＣＲ结果出现假阴性；也有可能是柑桔黄龙病病菌还未从叶片扩散蔓延到叶茎。正如鹿连明等［１２］研究认为，柑桔黄龙病菌在柑桔植株体内存在一个增殖和运动的过程。因此，更长时间内烟草上柑桔黄龙病菌的消长变化情况，有待进一步研究。烟草叶茎中未检测到柑桔黄龙病菌，还可能与烟草叶茎可以有效阻止柑桔黄龙病菌的定殖有关。感染柑桔黄龙病菌的烟草植株未表现出病症，说明烟草对柑桔黄龙病具有高度耐病性。此外，迄今尚未发现烟草上存在柑桔木虱卵和若虫。说明，烟草为柑桔木虱的非寄主植物，这也可能与柑桔木虱在烟草上的存活时间不超过３６ｈ有关。因此，可以考虑在桔园内及周边种植烟草防治柑桔木虱成虫，以期达到减少虫口基数的目的。
作者：夏长秀 孟丽雪 严翔 张宏宇 赵政 张油兵 方贻文 单位：江西省赣州市柑桔科学研究所 华中农业大学植物科技学院 园艺植物生物学教育部重点实验室
《柑桔木虱与烟草的关系》
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