篇一:实验室常用试剂配制
实验室常用溶液及试剂配制
实验室常用溶液、试剂的配制
表一 普通酸碱溶液的配制
表二常用酸碱指示剂
表三混合酸碱指示剂
表四容量分析基准物质的干燥
表五缓冲溶液的配制 1、 氯化钾-盐酸缓冲溶液
2、 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液
3、 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液
4、 乙酸-乙酸钠缓冲溶液
5、 磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液
6、 硼砂-氢氧化钠缓冲溶液
7、 氨水-氯化铵缓冲溶液
8、 常用缓冲溶液的配制
篇二:实验室常用溶液的配制
实验室常用溶液的配制
1.30%丙烯酰胺溶液(100ml)
【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的蒸馏水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于4℃温度。
【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸,因此大于1年的溶液应该被丢弃。
2.40%丙烯酰胺(用于DNA测序,1L)
【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足 至终体积为1L。置棕色瓶中保存于室温。
【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。 3.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液(1ml)
【配制方法】在0.8ml蒸馏水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水稀释1ml
【注意】分装成小份保存于-70℃
4.10mol/L乙酸铵溶液(1L)
【配制方法】把770g乙酸铵溶解于800ml蒸馏水中,加水稀释至1L后过滤除菌。在4°C储存。
【注意】乙酸铵是热不稳定的。不要高压灭菌。
5.10%过硫酸铵溶液(10ml)
【配制方法】把1g过硫酸铵溶于8ml蒸馏水中,用蒸馏水补足体积至10ml。该溶液可在4℃保存数周。
6.1mol/L CaCl2溶液(200ml)
【配制方法】称取54g CaCl2·6H2O并溶解在170ml蒸馏水中,用蒸馏水补足体积至200 ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
【用法】制备感受态细胞时,将等分试样解冻,用蒸馏水稀释至100ml。通过Nalgene过滤器(0.45微米)过滤除菌,并在使用前冷却至0℃。
7.2.5mol/L CaCl2溶液(20ml)
【配制方法】称取13.5g CaCl2·6H2O并溶于15ml蒸馏水中,用蒸馏水补足体积至20ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
8.脱氧核苷三磷酸(dNTPs)溶液
【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种
dNTP的实际浓度。
计算每个dNTP的实际浓度。对于路径长度为1cm的比色皿,吸光度等于消光系数和摩尔浓度的乘积。
然后用蒸馏水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分别分装成小份贮存于-70℃。
9.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液(20ml)
【配制方法】称取3.09g DTT,溶于15ml蒸馏水中,用0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)补足体积至20ml。通过0.22微米过滤器过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】不要对DTT或含有DTT的溶液进行高压灭菌。
10.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液(1L)
【配制方法】在800ml蒸馏水中加入186.1gNa2EDTA·2H2O,在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用NaOH调节溶液的pH值至8.0(约需20g NaOH颗粒),然后稀释至1L,分装后高压灭菌备用。在室温下保存。
【注意】EDTA二钠盐不溶于水,需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0,才能完全溶解。 分配适当的等分试样并通过高压灭菌消毒。
11.溴化乙锭(10mg/ml溶液)(100ml)
【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于4°C。
【注意】小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。使用后,这些溶液应进行净化。有关如何执行此操作的详细信息,请参阅机构指南。
12.2×HEPES缓冲盐溶液(100ml)
【配制方法】用90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡萄糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水稀释至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。
13.1mol/l异丙硫基-β-D-半乳糖苷IPTG溶液(10ml)
【配制方法】IPTG(分子量为238.3),在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后,用蒸馏水稀释至10ml,用0.22μm一次性滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
14.1mol/L乙酸镁(MgOAc)溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解214.46g四水乙酸镁,稀释至1L过滤除菌。在室温下保存。
15.1mol/L MgCl2溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水稀释至1L,分装成小份并高压灭菌备用。在室温下保存。
【注意】MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。
16.酚/氯仿溶液
【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)萃取几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层,保存于4℃。
【注意】酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
17.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液(10ml)
【配制方法】用10ml异丙醇溶解PMSF成1.74mg,分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L)。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢
弃。PMSF的水溶液在其已经变为碱性(pH> 8.6)并在室温下储存几小时后可以安全地丢弃。 (PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为35min。)
18.1mol/L乙酸钾(pH7.5)溶液(100ml)
【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml蒸馏水中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后稀释到100ml,分装成小份后保存于-20℃。
19.3mol/L乙酸钠(pH7.0)溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2,稀释到1L,分装后高压灭菌。在室温下保存。
20.3mol/L乙酸钠(pH5.2)溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至7.0,稀释到1L,分装后高压灭菌。在室温下保存。
21.5mol/L NaCl溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解292.2g NaCl加水稀释至1L,分装后高压灭菌。在室温下保存
22.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液(1升)
【配制方法】在900ml蒸馏水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃溶溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水稀释至1L,分装备用。在室温下保存。
【注意】SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS。10%SDS溶液无须灭菌。
23.20×SSC(NaCl和柠檬酸钠)溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠,加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0,加水稀释至1L,分装后高压灭菌。在室温下保存。
24.20×SSPE溶液(盐,磷酸钠,EDTA)(1升)
【配制方法】在800ml毫升水中溶解175.3g NaCl,31.2g NaH2PO4·2H2O和7.4g EDTA,用NaOH溶液调节pH值至7.4(约需6.5ml 10ml/L NaOH),加水稀释至1L,分装后高压灭菌。在室温下保存。
25.100%三氯乙酸(TCA)溶液(500g TCA)
【配制方法】在装有500g TCA的瓶中加入227ml蒸馏水,形成的溶液含有100%(M/V)TCA。在室温下保存。
26.1mol/L Tris溶液(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解121.91g Tris碱,加入浓HCl调节pH值至所需值。对于pH 7.4,加入70ml HCl; 对于pH为7.6加入60ml HCl; 对于8.0的pH,加入42ml HCl。加水稀释至1L,分装后高压灭菌。在室温下保存。
【注意】如1mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。Tris溶液的pH值因温度而异,温度每升高1℃,pH值大约降低0.03个单位,应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值。例如:0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
27.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/l Tris)(1升)
【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱,加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4,用蒸馏水稀释至1L,分装后高压灭菌(15lb in-2液体循环中20min),于室温保存。
28.电泳用Tris-乙酸(TAE)(50X)(1升)
【配制方法】称重242g Tris碱,加入800毫升蒸馏水溶解。加入57.1ml冰醋酸和100ml 0.5mol/lEDTA(pH8.0),用蒸馏水补足体积至1升。在室温下保存。
【用法】用蒸馏水稀释1:49。TAE具有相当低的缓冲能力,并且在延伸电泳期间倾向于耗尽。因此,当在高电流下长时间进行电泳时,建议更换缓冲液或两个储存器之间的再循环。
篇三:实验室常用溶液配制
常用溶液的配制
1 细菌培养相关溶液
1) LB培养基:
胰蛋白胨10g 酵母提取物5g NaCl 10g
5M NaOH调PH至7.0 加去离子水至1000ml 高压灭菌
2) 氨苄青霉素:1g溶于10ml水中,使用时1:1000
稀释
卡那霉素:1g溶于20ml水中,使用时1:1000稀释。
2 细胞培养相关溶液
1) DMEM培养基:
DMEM干粉(Gibco)1袋 加入适量去离子水中
NaHCO3 3.7g HEPES 3g 搅拌溶解
1M HCl或1M NaOH调节PH至7.0-7.2 定容至1000ml,
0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。 2) 1640培养基:
1640干粉(Gibco)1袋 加入适量去离子水 NaHCO3 2g
HEPES 3g 搅拌溶解
1M HCl或1M NaOH调节PH至7.0-7.2 加入去离子水至1000ml 用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌
3) 胰蛋白酶液(0.25%Trypsin-0.04%EDTA消化液): Trypsin 1.25g EDTA 0.2g NaCl 3.5g
Na2HPO4?12H2O 0.15g KH2PO4 0.12g Tris 1.5g KCl 0.185g D-葡萄糖 0.5g 酚红 0.005g 加去离子水溶解 定容至500ml
0.22μm的微孔滤膜过滤除菌 4) 1x PBS(1L) : NaCl 8g KCl 0.2g
Na2HPO4?12H2O 1.44g K2HPO4 0.24g 加蒸馏水800ml 盐酸调PH至7.4 加水定容至1000ml
3 Western-blot 相关试剂
1) 30%丙烯酰胺溶液:
丙烯酰胺29g
N,N-亚甲双丙烯酰胺1g 加入适量去离子水充分溶解
定容至100ml(不高压) (至少搅拌半小时)普通滤纸过滤
避光、室温贮存于棕色瓶中 2) 1.5M Tris-Cl(PH8.8):
Tris碱18.15g 去离子水80ml 浓盐酸调PH值8.8 加去离子水定容至100ml
3) 1.0M Tris-Cl(PH6.8):
Tris碱12.1g 去离子水80ml, 浓盐酸调PH至6.8 加去离子水定容至100ml 1.0M Tris Cl
用800ml 蒸馏水溶解121.1g Tris 碱,加浓盐酸调Ph
pH:7.4HCl:70ml
7.6 60ml 8.0
42ml
应使溶液冷却至室温后 调pH
加水定容至1L分装 高压灭菌
如果1mol/L 溶液呈现黄色 应丢弃 4) 10%(m/v)过硫酸胺:
过硫酸胺0.1g溶于1ml去离子水中,现用现配。或者:贮存于4度 5) 10%SDS:
在180ml水中溶解 20g电泳级SDS 加热至68℃助溶 浓盐酸调PH值至7.2 加水定容至200ml。
6) Tris-甘氨酸电泳缓冲液(5×):
Tris碱15.1g 甘氨酸94g SDS 5g 加去离子水溶解 定容至1000ml
7) 2×SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液:
Tris碱0.6g DTT 1.54g SDS 2g 溴酚蓝0.1g 甘油10ml
加适量去离子水混匀 定容至50ml
2x SDS Loading buffer 2ml 1M Tris(Ph6.8)
4ml 20% SDS 8ml 50% glycerol 4mg BPB(溴酚蓝) 2ml H2O
共16ml 用时取0.8ml 此母液 加入0.2ml 1M DTT 和蛋白酶抑制剂
10x SDS Running buffer 1L:144g glycine 30.25g Tris
10g SDS 加水定容至1L 8) 电转移缓冲液:
甘氨酸2.9g Tris碱5.8g SDS 0.37g 甲醇200ml
加去离子水定容至1000ml 10x Western转移缓冲液 29g 甘氨酸 58g Tris 18.5ml 20% SDS 补水至800ml(不高压)
用时每80ml稀释10倍 另补加200ml甲醇 9) 甲醇/醋酸脱色液:
甲醇450ml 冰醋酸100ml
加去离子水定容至1000m
考马斯亮蓝(commassise bright blue R250)染液:
考马斯亮蓝0.25g
溶于100ml甲醇/醋酸脱色液中(搅拌半小时以上)
或者:考马斯亮蓝染液: 45ml 水 45ml 甲醇 10ml 冰乙酸
0.25g 考马斯亮蓝R250 搅拌半小时以上 普通滤纸过滤 Whatman 1号滤纸过滤
10) 1x TBS-T(0.05%Tween-20): Tris碱2.42g NaCl 8g 去离子水800ml
盐酸调PH值至7.6(浓盐酸约12ml) 加0.5ml 的Tween-20 加水定容至1000ml。
11) 封闭液:
TBS-T(0.05%Tween-20)中加入5%新鲜
脱脂奶粉,现用现配
100ml TBST(1x)加入5g奶粉
4细胞总蛋白提取相关溶液
1) 蛋白酶抑制剂母液:
100mM PMSF(以异丙醇溶解) 10mg/ml leupeptin(去离子水溶解)
1mg/ml aprotinin(0.01M HEPES[PH8.0]溶解) 2) RIPA细胞裂解液:
用PBS配制
加入1%NP40,0.5%脱氧胆酸钠 0.1%SDS
临用前加入蛋白酶抑制剂(1mM PMSF;1μg/ml leupeptin;2μg/ml aprotinin)
5 EMSA相关溶液
1) 4%非变性聚丙烯酰胺凝胶:
10×TBE 1ml
37.5:1丙烯酰胺 1.25ml 40%丙烯酰胺0.75ml 80%甘油0.625ml 去离子水16.2ml 10%过硫酸铵150μl TEMED 10μl; 2) 37.5:1丙烯酰胺溶液:
丙烯酰胺37.5g 甲叉双丙烯酰胺1g 加去离子水定容至100ml 3) 5×结合液:
MgCl2 5mM NaCl 0.25M DTT2.5mM EDTA 2.5mM 20%甘油
Tris-Cl 50mM (PH7.5) 0.25mg/ml poly(dI-dC) 4) 10×上样缓冲液:
Tris-Cl 250mM (PH7.5) 0.2%溴酚蓝 40%甘油
6核蛋白提取相关溶液
1) Buffer A:
Hepes 10mM(PH7.8) MgCl2 5mM KCl 10mM DTT 1mM PMSF 0.5mM
临用前加1mM的NaF和Na3VO4; 2) Buffer C:
Hepes 20mM MgCl2 5mM NaCl 0.5M DTT 1mM PMSF 0.5mM EDTA 0.1mM 20%甘油。
裂解缓冲液 Lysis buffer (IP用,表达也可用):Hepes(pH7.2) 2.4g Nacl 1.5g TritonX-100 1.5ml NaF (1M) 0.5ml
加水至500ml(调pH7.2) 用前补加:DDT至1mM Na3VO4至1mM 蛋白酶抑制剂
《实验室常用溶液配制》
由:免费论文网互联网用户整理提供,链接地址:
http://m.csmayi.cn/meiwen/16229.html
转载请保留,谢谢!
- 上一篇:很吵的歌
- 下一篇:同学聚会照片ppt