篇一：细菌的分离纯化和接种实验
环工综合实验
细菌的分离纯化和接种实验
实验报告
环境科学与工程学院实验中心
篇二：微生物实验报告细菌
微生物实验报告
题目
年级专业
实验者
学号
小组
成员
指导老师
一、实验目的 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 2013级临床医学八年制
1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材
1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网
2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒
3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机
4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基
5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基
6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水
7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯
三、实验方法与步骤
1.培养基的制备
称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→ 用橡皮筋扎好 →放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌
2.空气与人体体表细菌学检查
2.1空气的细菌学检查
每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
2.2人体体表细菌学检查
甲丙常规洗手，乙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁分别共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。
3.细菌的分离培养
3.1 实验方法
平板划线法：借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。
3.2实验步骤
接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果 。
4.细菌的纯培养
甲→普通平板→金黄色菌落(auratus，golden yellow)→1支斜面
乙→普通平板→白色菌落(albus，white)→1支斜面
丙→ EMB平板→紫黑色菌落(atropurpureus)→1支斜面
丁→ EMB平板→粉红色菌落(pink) →1支斜面
斜面正面上2/3作标记：组号 + 金黄、白色、紫黑、粉红。
5.细菌的形态学检测
5.1革兰试剂染色
5.2显微镜油镜使用步骤
10×物镜→看清标本→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中→模糊物象→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源→ 擦镜纸拭去香柏油 →擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）
混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。
5.3肉汤接种法
接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6小时
6.细菌的生化试验
6.1细菌的糖发酵实验
接种针烧灼灭菌→用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌苔→分别接种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内→接种环烧灼灭菌→将微量管平放在平板内→37℃培养过夜后→观察结果。
6.2药敏实验
接种环烧灼灭菌→分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布（如图6）→接种环烧灼灭菌→ 标记:青、头、庆 →镊子火焰消毒→贴青霉素、头孢曲松、庆大霉素纸片→ 按压→镊子消毒→倒置37℃培养
6.3凝固酶实验
取干净玻片一张→在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴→接种环烧灼灭菌→冷却→分别用接种环取之前实验所得到的白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合→边混匀边观察结果→接种环烧灼灭菌→稍等片刻，观察结果
6.4动力实验
接种针烧灼灭菌→分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌→从半固体培养基中心垂直刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底→循原来的路线退出接种针→试管口迅速通过
篇三：培养基配制及灭菌实验报告单
培养基配制及灭菌实验报告单
班级名字 小组成员 时间指导老师
一、 实验目的
了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握高压蒸汽灭菌操作方法。
二、实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
马铃薯培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养
基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物 生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
平板划线接种法（分离培养法）：是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。
三、试剂与器材
1.器材
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽
灭菌锅、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、镊子等。
2.试剂
马铃薯、葡萄糖、琼脂、水等
四、实验内容
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排气→取物→无菌检查
五、关键步骤及注意事
1.要严格按配方配制。
2.调pH不要过头。
3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。
六．讨论
1.如何检验灭菌后培养基是否合格？
2.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待降到0时才能打开排气阀，开盖取物？
《培养基的制备与细菌的接种的实验报告》
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