停滞效应

篇一：案例分析-老师我很生气

案例分析:老师我很生气

摘要：中学生心理问题中有一个表现是“停滞效应”。通过案例

分析，分析主人公小超出现“停滞效应”的原因和初步提出解决方

法。

关键词：生气 控制 “停滞效应”

一、该生基本情况分析：

男，18岁，高三。父64岁，母61岁,都是小学文化。父母均离婚

后再婚，第一次婚姻都各有子女，再婚后又生了小超，小超有一个

同母异父姐姐和同父异母哥哥。家人要求小超无论什么情况下都必

须听父母的话，不管父母的话对与否。如果小超不听父母话，姐姐、

姐夫就会关起门来不分青红皂白的揍小超；哥哥、嫂子和父母一起

溺爱他，但爸爸又会经常打他，尤其是他成绩不好的时候。父母只

管孩子吃饭穿衣，很少和孩子沟通与讨论，对孩子过分保护。

二、该生对发生问题的自我描述：

老师，我很生气，我们班同学都欺负我??有一天早自习前，我

正在吃面包，和同学闹着玩，随口说他象猪，他妈是老母猪——其

实平时我们经常开这样的玩笑的，但那个同学竟然“咣”地给了我

一个耳光，连我的眼镜都打掉了。我强忍着继续吃我的面包，等吃

完了，过了一会儿，我实在忍不住了，就跟老师说我耳朵不舒服，

趴在桌上哭，可是同学竟然取笑我，说我哭起来象婴儿一般的哼哼

篇二：基因工程名词解释

1.工具酶：基因工程的操作，是在分子水平上的操作，依赖一些酶作为工具对基因进行人工切割，拼接和扩增等操作，所以把这些酶称之为“工具酶”。

2.限制性核酸内切酶简称限制酶，是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。

3.平头末端：两条链断开的位置在识别序列的对称中心产生平末端

4.粘性末端：两条链上断开的位置是交错的对称地分布在识别序列中心位置两侧，产生粘性末端

5.同裂酶：来源不同,识别相同序列的限制酶

6.同序同切酶：识别序列和切割位置都相同

7.同序异切酶：识别序列相同，切割位点不同

8.同尾酶：识别序列不同，但是产生相同的粘性末端的限制酶

9.II型限制性内切酶由于反应条件的改变，其限制酶的特异性发生松动，识别和切割序列发生改变，这一特性称为星号活性。

10.DNA连接酶：可使一段DNA的3` 羟基末端和5`磷酸末端形成3`，5`- 磷酸二酯键，把两个DNA片段连在一起，封闭DNA双链上切口的酶。

11. DNA聚合酶：在引物和模板存在下，把脱氧核糖单核苷酸连续的加到双链DNA分子引物链的3’-OH端，催化核苷酸的聚合作用。

12.?G 值：是指DNA 双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性，△G值越大，则双链越稳定。

13.平台期：PCR反应过程中，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA 片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期， 即出现“停滞效应”。

14.绝对定量：测定目的基因在样本中的拷贝数（必须使用已知拷贝数的绝对标准品，必须做标准曲线）

15.相对定量：测定目的基因在样本中的含量的相对比例，不需要知道其拷贝数

16.Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数

17.分子杂交：有一定同源性的两条核酸单链，在适宜的温度和离子浓度等条件下，通过碱基互补退火形成稳定的双链分子的过程 。

18. 探针：核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。

19.印迹：将DNA、RNA或蛋白质固定到固体支持物上的过程。

20.DNA印迹：利用毛细管原理将DNA电泳带转移到膜上。也称Southern印迹。

21.RNA印迹：电泳转移的对象是RNA，也称Northern印迹。

22. 膜上印迹杂交 ：指将待测核酸序列片段结合到一定的固相支持物上，然后与存在于液相中标记的核酸探针进行杂交的过程，是目前最常用的一种核酸分子杂交方法。这种膜上印迹杂交的技术也称印迹技术。

23.载体：携带外源目的基因或DNA片段进入宿主细胞进行复制和表达的工具称之为载体，其本质是DNA（少数为RNA）。

24.多克隆位点：也称为多位点接头，是指载体上人工合成的一段很短的含有紧密排列的多种限制性核酸内切酶的酶切位点的DNA片段

25.α-互补：是指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的 β-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补 。

26.非融合蛋白：不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白

27.融合蛋白：指两个不同的基因或基因片段连接在一起，使用同一个启动子进行翻译，而且二者直接没有终止子，结果翻译后，两个不同的蛋白就连在一起，形成融合蛋白

28.融合表达：表达载体的多克隆位点上有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白，方便后继的纯化步骤或者检测

29.转化：重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程

30.感受态细胞：处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞

31. 基因组的文库：某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体储存于某一受体菌的群体中，这个群体就称为该生物基因组的文库

32.亚克隆：对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆。

33.基因表达：是指基因所包含的遗传信息通过转录生成RNA，再经过翻译生成蛋白质的过程。这其中也包括以RNA为终产物的表达，如生成tRNA和rRNA的过程。

34.基因表达调控：基因表达有其特定的规律，并受到机体各种因素的调节和控制。

35.看家基因：基因在几乎所有细胞中持续地表达，其表达属于基础或组成型表达

36.包涵体：在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体。

37.深层培养：指与表面培养相对应，使用固体或液体培养基在固定的容器内通入无菌空气进行培养发酵的方法，现在通常用的是液体深层发酵。

38.补料分批培养：也叫流加培养，是在发酵反应器中接种培养一段时间后，间歇或连续地补加新鲜培养基，发酵结束前一段时间停止补料，发酵结束后一次性放料的培养方法。

39.连续培养：将种子接入发酵反应器中，先培养一段时间，使菌体细胞浓度和产物浓度达到一定的要求。然后，以恒定的速度开始进料和出料，控制一定稀释率进行不间断的培养。

40.透析培养：利用膜的半透性原理使代谢产物和培养基分离，通过去除培养液中的代谢产物来解除其对生产菌的不利影响。

41.宏观逃逸率: 当含有重组质粒的工程菌在非选择性条件下生长时，培养系统中

一部分细胞不再携带重组质粒，这些空载细胞数与总细胞数之比称为称为重组质粒的宏观逃逸率

篇三：PCR自测题

PCR自测题

一、名词解释

1.PCR

2.变性

3.退火

4.延伸

5.逆转录PCR

6.停滞效应

7.共享引物PCR

8.多重PCR

9.反向PCR

10.原位PCR

11.LCR

二、单项选择题

1．PCR反应中，所设计引物的长度一般为（ ）

A．5～10核苷酸 B. 15～30核苷酸 C. <50个核苷酸D.长度任意 E. 以上答案均不对

2．引物设计时G＋C含量在引物中一般占（ c ）

A. 20～40﹪ B. 30～60﹪ C. 45～55﹪ D.越高越好 E.含量随意

3．以下说法错误的是（ e ）

A 引物中的碱基组成应该尽可能的随机分布。

B 引物自身不应该存在互补序列

C 设计引物时应考虑使3?端引物和5?端引物具有相似的Tm值

D 引物的5?和3?端必须和模板严格配对结合

E 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70﹪

4．下列说法正确的是（ ）

C. PCR反应常用的缓冲液为10－50mmol/L的Tris-HCl（室温 PH 8.3－8.8）

D. 10mmol/L的KCl能促进引物的退火

E. 加入的BSA有利于破坏模板的二级结构

F. 二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶的活性。

E. Mg2+能降低Taq DNA聚合酶的活性。

5. TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子（ c ）

A．K+ B. Na+C. Mg2+ D. Ca2+ E. Cl-

6．适用于DNA序列中单个碱基突变的检测的方法是：( d)

A．筑巢PCRB. 多重PCRC. 锚定PCR D. LCR

7．以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学和肿瘤学的研究（ a）

A．原位PCR B．差异显示PCRC．不对称PCR D．反向PCR

8.已知一段设计好的引物的序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为（ ）

A. 78B. 80C. 82D. 84E. 无法计算

9．以下哪种PCR技术可以克服序列未能全知的障碍而获取目的扩增片段（ c ）

A.共享引物PCRB不对称PCR C锚定PCR D.筑巢PCR

10．一位疑似杜氏肌营养不良症的患者，可以采用以下哪种方法协助诊断（ ）

A.原位PCRB.多重PCRC.不对称PCR. D. 锚定PCR

11．以下关于dNTP的说法错误的是（ e ）

B.dNTP具有较强的酸性，使用时应将pH调至7.0-7.5

C.PCR反应中，四种dNTP必须按比例配制，以减少反应的错配率。

D. dNTP的浓度过高会增加碱基的错配率

E.dNTP的浓度低，反应速度下降，但特异性提高

12. TaqDNA聚合酶可以不要模板在ds DNA的末端加上一个( )碱基.

A. dGTP B. dCTPC. dATPD. dTTP

13. 有关PCR的描述哪个不对( d )

A.是一种酶促反应

B.引物决定扩增的特异性

C.扩增的对象是DNA序列

A) D.扩增的对象是氨基酸序列

14. 催化PCR的酶是 (c)

A. RNA聚合酶

B. DNA聚合酶

C. Taq DNA聚合酶

D. 反转录酶

15. PCR产物具有特异性是因为( c )

A. Taq DNA酶保证了产物的特异性

B. 合适的变性,退火,延伸温度

C. 选择特异性的引物

D. 引物的Tm值不同.

16．LCR的说法正确的是 ( )

A.体系中采用DNA聚合酶

B.须设计一对引物

C.反应需经过变性,复性,连接

D. LCR中,酶将dNTP加到引物的3-OH端

E.LCR具有高度敏感性

三、多项选择题

1．下列关于退火温度说法正确的是（ ）

A. 合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右。

B. 引物与模板的退火温度一般在－55℃之间

C. 在Tm值允许的范围内，选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性。

D. 退火时间至少需要一分钟。

2．进行PCR实验时以下措施有助于防止污染和结果的假阳性（ ）

B 隔离不同的操作区

C 分装试剂，减少重复取样所致的污染

D 严格实验操作

E 设立实验对照

3．适用于扩增3?或5?端未知序列的PCR技术是（ ）

A．反向PCR B. 锚定PCRC. 多重PCR D.不对称PCR

4． 以下关于PCR技术应用说法正确的是（） B 筑巢PCR和共享引物PCR有利于增强PCR反应的特异性，适用于模板含

量极少的样品的检测

C 不对称PCR可以大量制备单链DNA，可用于DNA的序列测定 D 彩色PCR适用于基因诊断和自动化DNA序列测定 E 定量PCR可用于基因表达和调控的研究

F 差异显示PCR可用于筛选和克隆受发育，突变等各种因素影响下差异表

达的基因

5. 关于引物设计说法正确的是（ ）

B 为保证PCR反应的特异性，所设计的引物长度一般>30个核苷酸 C 引物设计时G＋C含量在引物中一般为45～55﹪ D 按经验，引物自身存在的连续互补序列一般不超过3个碱基 E 两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3?端的互补重叠 F 引物的3?端可以游离而不影响PCR反应的进行

6. 以下关于PCR的说法正确的是（ ）

A PCR的模板可以是DNA也可以是RNA

B PCR的模板必须从组织细胞中分离出来

C PCR反应的特异性取决于引物和模板DNA的结合位点。 D PCR反应初期，目的DNA片断的增加呈指数扩增。 E PCR反应一般需要含102－105拷贝的模板

7．以下关于PCR反应条件错误的是（ ）

B PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板的二级结构，提高反应的

特异性。

CMg浓度过高会降低TaqDNA酶的活性，Mg浓度过低又会使酶催化非

特异性扩增增强。

D 4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。 E 引物浓度一般为0.5-1umol/L

8. PCR反应时应设立哪种对照（）

A. 阴性对照

B. 阳性对照

C. 试剂对照

D. 以上答案都正确

9. 逆转录反应体系包括（ ）

B.RNA模板，四种dNTP

C. RNA酶抑制剂

D. 合适的缓冲液体系

E.逆转录酶

F.寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物

10. 有关PCR的模板说法正确的是 ( )

A. 模板可以是DNA也可以是RNA

B.大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高

C. 模板用量低

D. 标本处理的基本要求是除去杂质

11. 以下有关RT-PCR反应的说法你认为正确的有()

A. 反应体系一般有20μl

B. 反应体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)

引物RNA模板和逆转录酶

C. 逆转录于42℃进行,随后即进行PCR

D. RT-PCR的最终反应过程依然是以DNA为模板的PCR反应

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